普通siRNA經濟型套餐A 優惠價¥1450 | 普通siRNA實惠套餐B 優惠價¥1650 | ||||
套餐內容 | 規格 | 純化方式 | 套餐內容 | 規格 | 純化方式 |
目的基因siRNA oligos | 3對(3×2 OD) | HPLC | 目的基因siRNA oligos | 4對(4×4 OD) | HPLC |
陰性對照siRNA oligos | 1對(1×1 OD) | HPLC | 陰性對照siRNA oligos | 1對(1×1 OD) | HPLC |
FAM標記陰性對照siRNA oligos | 1對(1×1 OD) | HPLC | FAM標記陰性對照siRNA oligos | 1對(1×1 OD) | HPLC |
陽性對照siRNA oligos | 1對(1×1 OD) | HPLC | 陽性對照siRNA oligos | 1對(1×1 OD) | HPLC |
化學修飾siRNA經濟套餐C 優惠價¥1750 | 化學修飾siRNA實惠套餐D 優惠價¥2150 | ||||
套餐內容 | 規格 | 純化方式 | 套餐內容 | 規格 | 純化方式 |
目的基因siRNA oligos | 3對(3×2 OD) | HPLC | 目的基因siRNA oligos | 4對(4×4 OD) | HPLC |
陰性對照siRNA oligos | 1對(1×1 OD) | HPLC | 陰性對照siRNA oligos | 1對(1×1 OD) | HPLC |
FAM標記陰性對照siRNA oligos | 1對(1×1 OD) | HPLC | FAM標記陰性對照siRNA oligos | 1對(1×1 OD) | HPLC |
陽性對照siRNA oligos | 1對(1×1 OD) | HPLC | 陽性對照siRNA oligos | 1對(1×1 OD) | HPLC |
熒光修飾siRNA經濟套餐E優惠價¥2350 | 熒光修飾siRNA實惠套餐F 優惠價¥2850 | ||||
套餐內容 | 規格 | 純化方式 | 套餐內容 | 規格 | 純化方式 |
目的基因siRNA oligos | 3對(3×2 OD) | HPLC | 目的基因siRNA oligos | 4對(4×4 OD) | HPLC |
陰性對照siRNA oligos | 1對(1×1 OD) | HPLC | 陰性對照siRNA oligos | 1對(1×1 OD) | HPLC |
FAM標記陰性對照siRNA oligos | 1對(1×1 OD) | HPLC | FAM標記陰性對照siRNA oligos | 1對(1×1 OD) | HPLC |
陽性對照siRNA oligos | 1對(1×1 OD) | HPLC | 陽性對照siRNA oligos | 1對(1×1 OD) | HPLC |
in vivo 化學修飾siRNA經濟套餐G優惠價¥2650 | in vivo 化學修飾siRNA實惠套餐H 優惠價¥3150 | ||||
(全鏈甲氧修飾,末端膽固醇修飾) | (全鏈甲氧修飾,末端膽固醇修飾) | ||||
套餐內容 | 規格 | 純化方式 | 套餐內容 | 規格 | 純化方式 |
目的基因siRNA oligos | 3對(3×2 OD) | HPLC | 目的基因siRNA oligos | 4對(4×4 OD) | HPLC |
陰性對照siRNA oligos | 1對(1×1 OD) | HPLC | 陰性對照siRNA oligos | 1對(1×1 OD) | HPLC |
FAM標記陰性對照siRNA oligos | 1對(1×1 OD) | HPLC | FAM標記陰性對照siRNA oligos | 1對(1×1 OD) | HPLC |
陽性對照siRNA oligos | 1對(1×1 OD) | HPLC | 陽性對照siRNA oligos | 1對(1×1 OD) | HPLC |
siRNA 轉染 | |||
A.siRNA轉染的方法 | |||
脂質體型轉染試劑進行轉染需要注重的幾點 | |||
哺乳動物轉染的常見方法有:磷酸鈣共沉淀、電穿孔法、DEAE-葡聚糖和polybrene、機械法(例如,顯微注射和基因槍)、陽離子脂質體試劑,其中陽離子脂質體試劑轉染法是目前最常用的轉染方法。 |
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B.Lipofectamin2000 轉染試劑 | |||
Lipofectamin2000的應用領域 | |||
選擇最適合的轉染試劑和轉染條件,往往取決于不同的哺乳動物細胞類型和不同的核酸分子。 Lipofectamin2000適用于核酸的體內和體外操作,可應用于DNA、RNA、反義寡核苷酸、siRNA的轉染,也可應用于DNA/siRNA 的共轉染操作;是一種新型的高效siRNA轉染試劑。 |
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Lipofectamin2000 的特點: | |||
不必更換培養基,操作簡便易行,可在半小時內完成操作 | |||
在含血清培養基中也能表現高轉染效率 | |||
細胞毒性低;適用細胞廣泛 | |||
即用型試劑,可在含有抗生素的完全培養基中轉染 | |||
基于脂質的轉染試劑,確保沒有RNAse活性 | |||
□ 可介導siRNA高轉染細胞及體內siRNA的高效導入 | |||
C.Lipofectamin2000適用的細胞類型 | |||
Lipofectamin2000轉染試劑可廣泛應用于多種細胞系的DNA和siRNA轉染如: HeLa(人頸部癌 細胞)、MCF-7(人乳房癌細胞)、Hep3B(人肝細胞癌細胞)、COS-7(猴腎細胞)、Neuro-2a(鼠神經母細胞瘤細胞)、NIKS(人角 質化細胞)、B16(鼠黑素瘤細胞)、DLD-1(人結腸癌細胞)、NIH/3T3(鼠胚胎成纖維細胞)、HT-29(人結腸腺癌細胞)、A549(人肺 癌細胞)、CHO-k1(倉鼠卵巢細胞)和293(腺病毒5 DNA轉化的人胚胎腎細胞),SVRbag4細胞等。 |
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D.轉染前細胞培養 | ||||||||||
在細胞板上培養細胞時,應使細胞匯合在24小時內達到70-90%。 | ||||||||||
細胞培養用品 | 表面積(mm2/孔) | 細胞密度 | 培養基(μL /孔) | |||||||
96孔板 | 50 | 1.5´104-5.0´104 | 100μL | |||||||
48孔板 | 100 | 3.0´104-1.0´105 | 200μL | |||||||
24孔板 | 200 | 8.0´104-2.0´105 | 500μL | |||||||
12孔板 | 401 | 1.6´105-4.0´105 | 1.0 mL | |||||||
6孔板 | 962 | 3.0´105-8.0´105 | 2.0 mL | |||||||
35 mm | 962 | 3.0´105-8.0´105 | 2.0 mL | |||||||
60 mm | 2827 | 1.0´106-2.5´106 | 6.0 mL | |||||||
E.合適的lipofectamin2000用量 | ||||||||||
合適的siRNA(DNA):lipofetamin2000比例對核酸的高效轉染有重要影響;我們推薦的 DNA:lipofetamin2000為1:0.5—1:5(ug:ul),siRNA:lipofectamin2000為 1:0.01-1:0.1(pmol:ul)一般情況下,此范圍內都可獲得高的轉染效率。 | ||||||||||
細胞培養用品 | siRNA/DNA | 培養基最終體積 | Lipofectamin2000(siRNA/DNA) | |||||||
96孔板 | 5pmol/0.2μg | 100μL | 0.25μl/0.5μl | |||||||
24孔板 | 20pmol/0.8μg | 500μL | 1μl /2μl | |||||||
12孔板 | 40 pmol /1.6μg | 1 mL | 2μl /4μl | |||||||
6孔板 | 100 pmol /4.0μg | 2 mL | 5μl /10μl | |||||||
35 mm | 100 pmol /4.0μg | 2 mL | 5μl /10μl | |||||||
60 mm | 600 pmol /8.0μg | 5 mL | 10μl /20μl |
F.貼壁細胞轉染程序 | ||
轉染前一天,4-5´104細胞接種在24孔板上, 0.5mL含FBS和抗生素的DMEM(或Opti-MEM,其他培養基)細胞培養基。 | ||
選用生理狀態良好的細胞對提高轉染效率很 | 2. 選擇用于初期接種的細胞數量,應能在24小時內使細胞匯合達到70-90%。 | |
重要。siRNA(DNA)和lipofectamin的用量和兩者的比例可在推薦范圍內適當調整。 | ||
在50μl的DMEM(或Opti-MEM,或其他無血清培養基)無血清培養基加入20pmol siRNA(或0.8μg DNA),柔和混勻; | ||
混勻lipofectamin試劑,用50μl無血清的DMEM或Opti-MEM,或其他無血清培養基)稀釋1μl lipofectamin試劑(DNA轉染時,則加入2μllipofectamin試劑),輕輕混勻,室溫放置5分鐘; | ||
將稀釋好的siRNA和RNAi-Mate試劑混合;輕柔混勻,室溫放置20分鐘,以便形成siRNA/lipofectamin(或DNA/lipofectamin)復合物。 | ||
將100μl siRNA/lipofectamin(或DNA/lipofectamin)復合物加到含有細胞和培養基的培養板的孔中,來回輕柔搖晃細胞培養板板。 | ||
7. 細胞在CO2培養箱中37℃溫育24h-48h后,進行轉染后的其它檢測步驟。如果細胞株比較敏感,孵育4-6小時后,除去復合物,更換培養基。 | ||
G.懸浮細胞轉染程序 | ||
轉染的當天,收集細胞離心,用含FBS的培養基重懸。 | ||
在50μl的DMEM(或Opti-MEM,或其他無血清培養基)無血清的培養基加入20pmol siRNA(或0.8μg DNA),柔和混勻; | ||
混勻lipofectamin試劑,用50μl無血清的DMEM或Opti-MEM,或其他無血清培養基)稀釋1μl lipofectamin試劑(DNA轉染時,則加入2μl lipofectamin試劑),輕輕混勻,室溫放置5分鐘; | ||
將稀釋好的siRNA和lipofectamin試劑混合;輕柔混勻,室溫放置20分鐘,以便形成siRNA/lipofectamin(或DNA/lipofectamin)復合物。 | ||
再加入400μL細胞懸浮液(細胞數量決定于細胞類型和轉染后分析測試的時間)。 | ||
6. 細胞在CO2培養箱中37℃溫育24h-48h后,進行轉染后的其它檢測步驟。如果細胞株比較敏感,孵育4-6小時后,除去復合物,更換培養基。 | ||
H.DNA和siRNA共轉染細胞 | ||
在轉染的前一天,4-5´104細胞接種在24孔板上,0.5 mL含FBS和抗生素的細胞培養基。 | ||
選擇用于初期接種的細胞密度,應能在24小時內使細胞匯合達到70-90%。 | ||
在100μL的無血清的培養基中稀釋20pmol siRNA和0.2μg DNA,加入2μl lipofectamin試劑,充分混合,放置20分鐘,以便形成siRNA/ DNA/lipofectamin復合物。 | ||
將siRNA/ DNA/lipofectamin復合物加入培養基中,輕輕混勻。 | ||
5. 細胞在37℃溫育24h-48h后,進行轉染后的其它步驟。 | ||
I.siRNA體內導入方法 | ||
適量的siRNA或DNA溶于不含RNA酶的無菌水中,輕輕混勻,因為注射液體積有限,建議采用高濃度的siRNA或DNA,一般DNA為2μg /μL、siRNA為10μg /μL。 | ||
取適量的DNA、siRNA或siRNA\DNA復合物與lipofectamin混合。例如,在1#管中加入0.5μL的DNA(1μg)和 0.5μL的siRNA(5μg),在2#管中加入0.55μL的lipofectamin(24μg)和0.45μL不含RNA酶的無菌水中,將1#管 中的溶液加入2#管中,在室溫下溫育30分鐘,以形成siRNA/DNA-lipofectamin復合物。 | ||
3. 制備的siRNA/DNA-lipofectamine復合物可用于體內導入siRNA、DNA或siRNA\DNA。 |
1.質量保證 | 2.發貨時間 | 3.關于售后 |
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