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| 套餐內容 | 規格 | 純化方式 | 套餐內容 | 規格 | 純化方式 |
| 目的基因siRNA oligos | 3對（3×2 OD） | HPLC | 目的基因siRNA oligos | 4對（4×4 OD） | HPLC |
| 陰性對照siRNA oligos | 1對（1×1 OD） | HPLC | 陰性對照siRNA oligos | 1對（1×1 OD） | HPLC |
| FAM標記陰性對照siRNA oligos | 1對（1×1 OD） | HPLC | FAM標記陰性對照siRNA oligos | 1對（1×1 OD） | HPLC |
| 陽性對照siRNA oligos | 1對（1×1 OD） | HPLC | 陽性對照siRNA oligos | 1對（1×1 OD） | HPLC |
| 化學修飾siRNA經濟套餐C 優惠價￥1750 | 化學修飾siRNA實惠套餐D 優惠價￥2150 | ||||
| 套餐內容 | 規格 | 純化方式 | 套餐內容 | 規格 | 純化方式 |
| 目的基因siRNA oligos | 3對（3×2 OD） | HPLC | 目的基因siRNA oligos | 4對（4×4 OD） | HPLC |
| 陰性對照siRNA oligos | 1對（1×1 OD） | HPLC | 陰性對照siRNA oligos | 1對（1×1 OD） | HPLC |
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| 熒光修飾siRNA經濟套餐E優惠價￥2350 | 熒光修飾siRNA實惠套餐F 優惠價￥2850 | ||||
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| （全鏈甲氧修飾，末端膽固醇修飾） | （全鏈甲氧修飾，末端膽固醇修飾） | ||||
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| siRNA 轉染 | |||
| A．siRNA轉染的方法 | |||
| 脂質體型轉染試劑進行轉染需要注重的幾點 | |||
| 哺乳動物轉染的常見方法有：磷酸鈣共沉淀、電穿孔法、DEAE-葡聚糖和polybrene、機械法（例如,顯微注射和基因槍）、陽離子脂質體試劑，其中陽離子脂質體試劑轉染法是目前最常用的轉染方法。 |
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| B．Lipofectamin2000 轉染試劑 | |||
| Lipofectamin2000的應用領域 | |||
| 選擇最適合的轉染試劑和轉染條件，往往取決于不同的哺乳動物細胞類型和不同的核酸分子。 Lipofectamin2000適用于核酸的體內和體外操作，可應用于DNA、RNA、反義寡核苷酸、siRNA的轉染，也可應用于DNA/siRNA 的共轉染操作；是一種新型的高效siRNA轉染試劑。 |
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| Lipofectamin2000 的特點： | |||
| 不必更換培養基，操作簡便易行，可在半小時內完成操作 | |||
| 在含血清培養基中也能表現高轉染效率 | |||
| 細胞毒性低；適用細胞廣泛 | |||
| 即用型試劑，可在含有抗生素的完全培養基中轉染 | |||
| 基于脂質的轉染試劑，確保沒有RNAse活性 | |||
| □ 可介導siRNA高轉染細胞及體內siRNA的高效導入 | |||
| C．Lipofectamin2000適用的細胞類型 | |||
| Lipofectamin2000轉染試劑可廣泛應用于多種細胞系的DNA和siRNA轉染如： HeLa(人頸部癌 細胞)、MCF-7(人乳房癌細胞)、Hep3B(人肝細胞癌細胞)、COS-7(猴腎細胞)、Neuro-2a(鼠神經母細胞瘤細胞)、NIKS(人角 質化細胞)、B16(鼠黑素瘤細胞)、DLD-1(人結腸癌細胞)、NIH/3T3(鼠胚胎成纖維細胞)、HT-29(人結腸腺癌細胞)、A549(人肺 癌細胞)、CHO-k1(倉鼠卵巢細胞)和293(腺病毒5 DNA轉化的人胚胎腎細胞),SVRbag4細胞等。 |
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| D．轉染前細胞培養 | ||||||||||
| 在細胞板上培養細胞時，應使細胞匯合在24小時內達到70-90%。 | ||||||||||
| 細胞培養用品 | 表面積（mm2/孔） | 細胞密度 | 培養基（μL /孔） | |||||||
| 96孔板 | 50 | 1.5´104-5.0´104 | 100μL | |||||||
| 48孔板 | 100 | 3.0´104-1.0´105 | 200μL | |||||||
| 24孔板 | 200 | 8.0´104-2.0´105 | 500μL | |||||||
| 12孔板 | 401 | 1.6´105-4.0´105 | 1.0 mL | |||||||
| 6孔板 | 962 | 3.0´105-8.0´105 | 2.0 mL | |||||||
| 35 mm | 962 | 3.0´105-8.0´105 | 2.0 mL | |||||||
| 60 mm | 2827 | 1.0´106-2.5´106 | 6.0 mL | |||||||
| E．合適的lipofectamin2000用量 | ||||||||||
| 合適的siRNA(DNA)：lipofetamin2000比例對核酸的高效轉染有重要影響；我們推薦的 DNA：lipofetamin2000為1：0.5—1：5（ug:ul），siRNA：lipofectamin2000為 1：0.01-1：0.1（pmol：ul）一般情況下，此范圍內都可獲得高的轉染效率。 | ||||||||||
| 細胞培養用品 | siRNA/DNA | 培養基最終體積 | Lipofectamin2000(siRNA/DNA) | |||||||
| 96孔板 | 5pmol/0.2μg | 100μL | 0.25μl/0.5μl | |||||||
| 24孔板 | 20pmol/0.8μg | 500μL | 1μl /2μl | |||||||
| 12孔板 | 40 pmol /1.6μg | 1 mL | 2μl /4μl | |||||||
| 6孔板 | 100 pmol /4.0μg | 2 mL | 5μl /10μl | |||||||
| 35 mm | 100 pmol /4.0μg | 2 mL | 5μl /10μl | |||||||
| 60 mm | 600 pmol /8.0μg | 5 mL | 10μl /20μl | |||||||
| F．貼壁細胞轉染程序 | ||
| 轉染前一天，4-5´104細胞接種在24孔板上， 0.5mL含FBS和抗生素的DMEM（或Opti-MEM，其他培養基）細胞培養基。 | ||
| 選用生理狀態良好的細胞對提高轉染效率很 | 2． 選擇用于初期接種的細胞數量，應能在24小時內使細胞匯合達到70-90%。 | |
| 重要。siRNA(DNA)和lipofectamin的用量和兩者的比例可在推薦范圍內適當調整。 | ||
| 在50μl的DMEM（或Opti-MEM，或其他無血清培養基）無血清培養基加入20pmol siRNA(或0.8μg DNA)，柔和混勻； | ||
| 混勻lipofectamin試劑，用50μl無血清的DMEM或Opti-MEM，或其他無血清培養基）稀釋1μl lipofectamin試劑（DNA轉染時，則加入2μllipofectamin試劑），輕輕混勻，室溫放置5分鐘； | ||
| 將稀釋好的siRNA和RNAi-Mate試劑混合；輕柔混勻，室溫放置20分鐘,以便形成siRNA/lipofectamin（或DNA/lipofectamin）復合物。 | ||
| 將100μl siRNA/lipofectamin（或DNA/lipofectamin）復合物加到含有細胞和培養基的培養板的孔中，來回輕柔搖晃細胞培養板板。 | ||
| 7． 細胞在CO2培養箱中37℃溫育24h-48h后，進行轉染后的其它檢測步驟。如果細胞株比較敏感，孵育4-6小時后，除去復合物，更換培養基。 | ||
| G．懸浮細胞轉染程序 | ||
| 轉染的當天，收集細胞離心，用含FBS的培養基重懸。 | ||
| 在50μl的DMEM（或Opti-MEM，或其他無血清培養基）無血清的培養基加入20pmol siRNA(或0.8μg DNA)，柔和混勻； | ||
| 混勻lipofectamin試劑，用50μl無血清的DMEM或Opti-MEM，或其他無血清培養基）稀釋1μl lipofectamin試劑（DNA轉染時，則加入2μl lipofectamin試劑），輕輕混勻，室溫放置5分鐘； | ||
| 將稀釋好的siRNA和lipofectamin試劑混合；輕柔混勻，室溫放置20分鐘,以便形成siRNA/lipofectamin（或DNA/lipofectamin）復合物。 | ||
| 再加入400μL細胞懸浮液（細胞數量決定于細胞類型和轉染后分析測試的時間）。 | ||
| 6． 細胞在CO2培養箱中37℃溫育24h-48h后，進行轉染后的其它檢測步驟。如果細胞株比較敏感，孵育4-6小時后，除去復合物，更換培養基。 | ||
| H．DNA和siRNA共轉染細胞 | ||
| 在轉染的前一天，4-5´104細胞接種在24孔板上，0.5 mL含FBS和抗生素的細胞培養基。 | ||
| 選擇用于初期接種的細胞密度，應能在24小時內使細胞匯合達到70-90%。 | ||
| 在100μL的無血清的培養基中稀釋20pmol siRNA和0.2μg DNA，加入2μl lipofectamin試劑，充分混合，放置20分鐘,以便形成siRNA/ DNA/lipofectamin復合物。 | ||
| 將siRNA/ DNA/lipofectamin復合物加入培養基中，輕輕混勻。 | ||
| 5． 細胞在37℃溫育24h-48h后，進行轉染后的其它步驟。 | ||
| I．siRNA體內導入方法 | ||
| 適量的siRNA或DNA溶于不含RNA酶的無菌水中，輕輕混勻，因為注射液體積有限，建議采用高濃度的siRNA或DNA，一般DNA為2μg /μL、siRNA為10μg /μL。 | ||
| 取適量的DNA、siRNA或siRNA\DNA復合物與lipofectamin混合。例如，在1#管中加入0.5μL的DNA（1μg）和 0.5μL的siRNA（5μg），在2#管中加入0.55μL的lipofectamin（24μg）和0.45μL不含RNA酶的無菌水中，將1#管 中的溶液加入2#管中，在室溫下溫育30分鐘，以形成siRNA/DNA-lipofectamin復合物。 | ||
| 3． 制備的siRNA/DNA-lipofectamine復合物可用于體內導入siRNA、DNA或siRNA\DNA。 | ||
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