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广东快乐十分私彩:Western blot檢測


Western Blot
    免疫印跡immunoblotting又稱蛋白質印跡western blot,它是根據抗原抗體的特異性結合檢測復雜樣品中的某種蛋白的方法。Western blot是在凝
膠電泳和固相免疫測定技術基礎上發展起來的一種新的免疫生化技術。由于western blot具有SDS-PAGE的高分辨力和固相免疫測定的高特異性和敏
感性,現已成為蛋白分析的一種常規技術。Western blot常用于鑒定某種蛋白,并能對蛋白進行定性和半定量分析。 
    權陽生物為提供標準western blot技術服務(您需自備一抗)。并對band進行灰度分析,得出蛋白表達相對定量結果。
服務要求
    需新鮮或正確保存的蛋白樣品或者蛋白粗提液,陽性對照樣品(如果有), 檢測目的蛋白的一抗(或由Transheep代購)。組織樣品不少于50mg
;細胞不少于5×106個;總蛋白濃度不低于 2μg/μl(至少50μl)。
服務基本流程
    1. 蛋白提取和定量(如果提供蛋白樣品,則直接電泳預實驗檢測抗體特異性);
    2. SDS-PAGE 10-15% 變性聚丙烯酰胺凝膠電泳;
    3. 轉膜(PVDF膜);
    4. 封閉 (5%脫脂奶粉);
    5. 一抗孵育(其中內參基因為Tubulin或HistoneH3.1);
    6. 二抗孵育(如果由于材料降解或一抗造成實驗無法繼續,則收相關預實驗費用);
    7. 顯色(ECL);
    8. 曝光、洗片、灰度分析;

服務流程


服務說明


Western Blot基因表達范例
收集生長狀態良好的目的細胞,提取蛋白,采用Western Blot的方法檢測目的基因的表達情況。
檢測結果如下:   


 PC為抗體說明書建議的作為陽性對照用細胞蛋白樣品。上圖顯示A細胞目的基因表達豐度更高。Western blot檢測抗體是否有效,
檢測目的細胞中目的基因的內源表達。 

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